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The centrifugation-washing step was repeated twice more and followed with a re-constitution of the cells in 100 l of FACS medium and analysis using either a FACSCalibur machine (BD Biosciences) or a CytoFlex machine (Beckman-Coulter Life Sciences) and the FCS Express software (De Novo Software)

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Thus, beyond cytokines and transcription factors, integrated metabolic pathwaysincluding glycolysis, fatty acid and amino acid metabolismare fundamental regulators of the Th17/Treg balance and immune homeostasis ( Figure 1 )